В последние годы значительные успехи достигнуты в биотехнологических работах, проводимых с использованием клеток животных. Уже длительное время применяют технику гибридизации животных клеток разного происхождения, а также перенос чужеродных генов в культивируемые клетки.
В середине 70-х годов вирусолог Рудольф Ениш (ФРГ) провел первый успешный эксперимент по переносу чужеродного гена в геном целого животного организма (мыши). В качестве переносчика гена (вектора) использовали вирус лейкоза мышей. В дальнейшем были отработаны различные варианты переноса генов в животных (трансгенные животные), включая прямую микроинъекцию в пронуклеус зиготы. Подобные эксперименты оказали решающее воздействие на вовлечение клеток животных в биотехнологию. Существенно то, что только на базе клеток животных можно получать такие важные для медицины биотехнологические продукты, как антитела и вакцины. Использование клеток животных для продуцирования других биологически активных продуктов пока, как правило, экономически менее выгодно, чем на базе микроорганизмов. Однако получить некоторые полноценные белки можно только из клеток животных.
В организме он продуцируется клетками передней доли гипофиза. Вес этой доли - меньше одной десятой грамма, и лишь небольшая часть ее клеток занята выработкой гормона роста. Его нехватка в организме снижает темп роста, вызывает карликовость (карликовые мыши весят примерно в 2 раза меньше нормальных). Введением гормона можно нормализовать рост.
В медицине при лечении одного пациента требуется 7 мг в неделю очищенного гормона, который ранее получали из гипофиза человека (трупного материала). Наряду с этим уже налажено микробиологическое производство генно-инженерного гормона, позволяющее получать 100 мг препарата из 1 л культуральной среды. В принципе этим способом можно производить килограммы гормона, причем независимо от природы гормона и клеток, где он производится в норме. Генио-инженерное микробиологическое производство выравнивает (унифицирует) условия наработки всех продуктов, т. е. делает биотехнологию индустриальной. Старьте же способы получения в сильной мере зависят от особенностей ткани и концентрации в ней гормона, требуют иногда переработки огромных масс дорогостоящих тканей. К примеру, для получения 25 - 30 мкг гормона секретина необходимо 1 т кишечника коров.
Список производимых гормонов непрерывно пополняется, и их очередность определяется как практической важностью, так и готовностью науки. Создать необходимые продуценты. К гормонам, производство которых начато или начинается, относятся эритропоэтин (регулятор образования эритроцитов и, следовательно, гемоглобина), энкефалины и эндорфины (гормоны нервной системы, которые применяют для снятия болевых ощущений, улучшения памяти, тонуса, настроения).
Микробные клетки пригодны и для производства некоторых стероидных гормонов. Например, Artbrobacter globiformis используют для синтеза преднизолона из гидрокортизона, Микробиологическая трансформация позволяет резко сократить число этапов химического синтеза гормона надпочечников - кортизона.
Всего за 10 лет (первые трансгенные мыши были получены в 1980 г.) создана уникальная область генно-инженерных животных. Трансгенные мыши всего за одно поколение претерпевают такие целенаправленные изменения, для достижения которых ранее требовалось проводить селекцию на 40 - 50 поколениях. Они способны продуцировать совершенно новые виды белковых продуктов, которые иногда оказывают эффективные воздействия на рост и развитие самих мышей. В результате, переноса дополнительного гена гормона роста (неважно, из какого источника - из другого животного, человека) образуется избыточное количество гормона роста, стимулирующего рост: размеры мыши удваиваются (таких трансгенных мышек называют гигантскими).
Трансгенные мыши стали обычными объектами лабораторных исследований и уже вносят неоценимый вклад в фундаментальные научные исследования. Однако они совершенно не пригодны для целен биотехнологического производства. Начиная с 1985 г. во многих лабораториях пытаются получить трансгенных сельскохозяйственных животных - овец, свиней. За это время удалось преодолеть методические трудности проведения таких работ на сельскохозяйственных животных. Уже получено большое число овец и свиней, содержащих чужеродные гены. Планируется получение ряда важных медицинских препаратов - фактора свертываемости крови, интерферонов и т. д.
Очень хотелось бы воспроизвести на сельскохозяйственных животных продемонстрированный на мышах аффект ускоренного роста. Специалисты считают, что трансгенные сельскохозяйственные животные - это живые биотехнологические фабрики XXI в., которые экологически будут наиболее чистыми производителями ценных белковых препаратов. Сегодня уже создана фундаментальная и методическая база, но требуется еще приспособить эти научно-технические достижения к условиям работы с сельскохозяйственными животными.
Разработано несколько методов введения генов в яйцеклетки или в ранние эмбрионы где они включаются в хромосомы и передаются вместе с дочерними хромосомами во все клетки развивающегося организма. В зависимости от того, какой регулятор содержит чужеродный ген, он функционирует в разных тканях. Например, если к перенесенному гену независимо от того, откуда он выделен (из бактерий, растений чело века, животного), подсоединен регулятор гена мыши который в норме функционирует в печени, то перенесенный ген будет функционировать в печени трансгенного животного. Следовательно, подбирая регуляторный элемент к любому гену, можно заранее “запланировать” его работу в том органе, в котором желательно.
Получено множество трансгенных мышей, в которых согласно плану (т. е. в соответствующих тканях и органах) функционируют гены вирусов и бактерий, растений, разных видов животных и человека. В результате функционирования перенесенных генов в клетках гипофиза трансгенных мышей синтезируется гормон роста человека, крысы, крупного рогатого скота, в поджелудочной железе синтезируется совершенно нормальный инсулин человека, в клетках крови - гемоглобин кролика и т. д.
Шотландским генетикам (Джону Кларку и др.) из Исследовательского центра разведения животных в совместной работе с французским молекулярным биологом Ричардом Лате удалось получить трансгенных мышей, в молочных железах которых синтезировался белок молока овцы (р-лактоглобулин), т. е. им удалось изменить качество молока. В США известный специалист в области биотехнологии животных Катерина Гордон получила мышей, молочные железы которых продуцируют человеческий активатор плазминогена - ценный медицинский препарат. Сотни разнообразных генов разного происхождения перенесено в мышей, и как правило, эти чужие гены нормально функционировали там, где предусмотрел экспериментатор.
