БИОТЕХНОЛОГИЯ

Поскольку растительные клетки окружены жесткими целлюлозными оболочками, для их слияния нужно предварительно растворить эту оболочку, сохранив находящуюся под ней нежную белково-липидную плазматическую мембрану. Клетки, лишенные целлюлозной оболочки, называют протопластами. Получают протопласты обработкой клеток смесью ферментов. Затем протопласты с обнажившейся плазматической мембраной сливают, получая гибридные клетки, несущие свойства обеих клеток-партнеров. Этим путем созданы межвидовые гибриды табака, картофеля, капусты с турнепсом. Протопласты используют та we для переноса в них органоидов других клеток - митохондрий, хлоропластов, цитоплазмы.

Приведем наиболее интересные гибриды, полученные в результате слияния клеток. Широкое распространение в США и Англии получил гибридный сорт помидоров, устойчивый к двум вирусам (PLRV и PVY), которые наносят наибольший вред этим растениям. Гибридный сорт создали в результате слияния протопластов дикого вида помидора S. brevidens, устойчивого к PLRV и PVY, и коммерческого помидора S. tuberosum. В Японии создан таким образом сорт помидора, устойчивого к высоким температурам.

Значительный прогресс в этой области произошел и благодаря искусственным ассоциациям растительных клеток с микроорганизмами, особенно с азотфиксирующими бактериями. Проблема придания растениям свойства азотфиксации имеет огромное народнохозяйственное значение, поскольку производство азотных удобрений требует больших затрат, а их использование загрязняет среду. Уже получены положительные результаты благодаря искусственным ассоциациям азотфиксирующей бактерии Anaboena variabilis и табака. Несколько подробнее о проблеме азотфиксации будет сказано ниже.

Несмотря на очевидные успехи клеточной инженерии, наибольший интерес в последнее время вызывают работы по целенаправленному изменению свойств сельскохозяйственных растений с помощью методов генной инженерии - конструирования и переноса генов в растительные клетки и в целые растения, В последние годы с появлением генно-инженерных методов клонирования генов и их переноса в растительные клетки, а затем и в регенерируемые из них растения стало возможным заметно быстрее создавать новые сорта. Это направление, зародившееся лишь в середине 80-х годов, быстро набирает темп. Изолировано множество генов растений и микроорганизмов, кодирующих признаки продуктивности, устойчивости к неблагоприятным факторам. Получено немало растений, содержащих такие гены. Растения, несущие в геноме чужеродные гены, т. с. трансгенные растения, постепенно внедряются в сельскохозяйственную практику, их вклад в производстве сельскохозяйственной продукции быстро растет. Прогнозируется, что рынок биотехнологически улучшенных растений и семян в США составит в 1992 г. 24 млн., долл., а в 1997 г. может достичь 122,5 млн. долл.

Здесь укажем некоторые звенья, воздействия на которое должно приводить к подавлению размножения вируса. После того как вирусная частица тем или иным путем попала в кровь, она проникает в “свои” клетки, т. е. Т-лимфоциты, на поверхности которых находится белок-рецептор, специфически узнаваемый поверхностными белками вируса. Этот белок-рецептор, названный CD, частично высовывается наружу из мембраны Т-лимфоцитов и имеет конфигурацию, комплементарную к наружной части поверхностного белка ВИЧ. Оба выступающих элемента мембранных белков подходят друг к другу как ключ к замку, и когда ВИЧ соприкасается с поверхностью Т-лимфоцита, они прочно соединяются, мембраны сливаются и содержимое вируса проникает в цитоплазму клетки. Только клетки, имеющие на поверхности Cbj-рецепторы, становятся мишенью ВИЧ и заражаются им.

Когда в цитоплазму клетки попадают компоненты вирусной частицы, обратная транскриптаза начинает по РНК строить молекулы вирусной ДНК, которые проникают в ядро и внедряются в хромосому, после более или менее продолжительного (иногда - годы) прерывания в неактивной форме находящаяся в хромосоме клетки ДНК вируса (провирус) вдруг, подобно молчавшему вулкану, начинает действовать, порождая новые частицы. В этом процессе участвуют клеточные ферменты, факторы и механизмы, так как (это очень важно) процесс транскрипции вирусной ДНК по механизму ничем не отличается от транскрипции любого клеточного гена. Значит, на этой стадии (транскрипции) очень трудно какими-либо лекарствами остановить размножение вируса, ибо они будут губительны и для генов клетки, притом не только содержащих вирус, но и всех других клеток организма.

Известно, что когда какой-либо вирус (например, гриппа) проникает в организм, к нему вырабатываются антитела - иммунная система мобилизуется. При заражении вирусом СПИД поначалу иммунная система вырабатывает антитела и к нему (многие диагностикумы на СПИД основаны, на обнаружении не самого вируса, а антител к нему). Поэтому на первом этапе, когда иммунная система борется с вирусом, его количество растет медленно, требуются годы, чтобы он достиг критической массы и преодолел сопротивление иммунной системы. Поскольку он поражает именно ее, то победа в конечном счете остается за вирусом, так как медленно, но верно Т4-лимфоциты выходят из строя.

Ни одна другая медицинская проблема столь быстро не вовлекла в сферу исследований и клиники таких ресурсов, как СПИД. Хотя со времени обнаружения вируса ВИЧ прошло около 7 лет, на испытании уже находятся десятки потенциальных лекарственных препаратов. Однако и задача оказалась уникальной по сложности, СПИД как бы сконцентрировал в себе все самые сложные проблемы современной медицины. Если бы это заболевание встало перед человечеством не в 90-е годы, а хотя бы на 30 - 40 лет раньше, когда наука еще не проникла в тайны молекулярных механизмов взаимодействия вируса и клетки, иммунной системы, не была вооружена генно-инженерными методами, - было бы невозможно определить даже направление поиска лекарственных средств для борьбы с ретровирусами. В свете же сегодняшних знаний, а также при наличии возможности размножать вирус вне организма в клетках in vitro, осуществлять генно-инженерные операции с клеточным и вирусным геномами специалистам ясно, в каком направлении вести поиск средств против СПИДа. Нужно найти факторы, способные прервать на какой-либо стадии репродукцию вируса, начиная от его проникновения в клетку. Большие успехи в борьбе с различными вирусными инфекциями были достигнуты с помощью вакцинации. Вакцинация - форма иммунопрофилактики, в которой весь агент или часть инфекционного агента вводится однократно, либо несколько раз для образования иммунного ответа, защищающего от последующей инфекции. Широкое распространение получили вакцины на основе живого или ослабленного вируса. Этим же путем пошли и при борьбе со СПИДом. Однако несколько проблем осложнило получение эффективной и дешевой вакцины. Сложность в случае СПИДа состоит в том, что вакцина должна активировать именно те клетки организма (Т4-лимфоциты и макрофаги), которые сами поражаются вирусом, т. е. должны сами себя очистись от вируса.

Перспективным представляется использование, например, видоизмененных регуляторных белков ВИЧ и которые из них полностью подавляют функционирование нормальных белков и предотвращают этим размножение вируса. Теоретически гены, кодирующие такие мутантные белки, можно вводить в стволовые клетки костного мозга в культуре, а затем трансформированные клетки переносить в костный мозг человека.

Для профилактики СПИДа создают диагностикумы для быстрого и однозначного обнаружения ВИЧ. Эта задача сейчас решена - есть хорошие диагностиками, налажено их массовое производство. Большинство таких диагностикумов основано па выявлении в крови вирусных белков с помощью антител. Но и здесь интенсивно ищут новые подходы. Перспективным считают обнаружение следовых количеств ВИЧ с помощью цепной полимеразной реакции. В результате 20 последовательно проведенных циклов “денатурация - синтез” в течение короткого времени количество анализируемой ДНК в пробе возрастает в миллионы раз, и она легко определяется с помощью реагентов.

Общественное движение за решение проблемы СПИДа только набирает силу (в нашей стране этот процесс идет с большом задержкой). Должно быть полностью осознано что наряду с ядерной опасностью и экологией СПИД стал общемировой проблемой. Необходимость в срочной мобилизации международных ученых привела к созданию глобальной программы по СПИДу, координируемой Всемирной Организацией здравоохранения (ВОЗ). Над созданием вакцин работают лаборатории многих стран, объединенных в специальную программу IIIVAC (от англ. HIV-vaccine) и возглавляемой первооткрывателем ретровирусов человека - Робертом Галло.

Пока же кривая числа зарегистрированных больных и вирусоносителей поднимается все выше: только в США за прошедшие годы больных было в 1987 г 50 тыс. в 1988 г. - 66464 человек, в 1989 г. - 113211. По данным ВОЗ, в 159 странах мира в феврале 1990 г. было зарегистрировано 215 тыс. больных (по неофициальным данным, их в 2 - 2,5 раза больше). Прогнозируется, что их число только в США составит в 1991 г 270 тыс. в 1992 г. - 365 тыс., в 1993 г. - 450 тыс. человек. Число вирусоносителей во всем мире оценивается сейчас от 5 до 10 млн. Ожидается резкий подъем вирусоносительства в ближайшие годы в СССР. Возможно ли, чтобы СПИД устоял против современного мира? Ученые уверены, что он будет побежден, хотя и неясно, когда и какой ценой. Такая оценка сегодняшних возможностей медицины в лечении СПИДа может показаться несправедливой, учитывая, что в популярной печати часто появляются сообщения, которые позволяют предполагать либо о решении проблемы лечения СПИДа, либо о близости такого решения. К сожалению, это заблуждение характерно и для других острых медицинских проблем (например, онкологической) Так недавно в газетах сообщалось об успехе в лечении больных СПИДом, достигнутом благодаря прогреву крови выкаченной из тела больного и затем влитой обратно. Однако в научной медицинской литературе пока нет достоверного описания и обоснования такого метода лечения.