БИОТЕХНОЛОГИЯ

Это короткие полипептиды, участвующие в организации иммунного ответа. С помощью генной инженерии в настоящее время созданы штаммы-продуценты Е. coli, производящие различные типы интерлейкинов человека. В СССР получен штамм-продуцент интерлейкина-2 (Институт органического синтеза АН Латвийской ССР), который используют для лечения рака почек. Получен рекомбинантный интерлейким-1, продуцируемый клетками Е. coli. Этот белок рекомендуют для лечения не только иммунных расстройств, но и некоторых опухолевых заболеваний.

Для создания высокоэффективных лекарственных средств в последнее время с помощью генно-инженерных методов конструируют бифункциональные белки, например, противоопухолевый препарат, представляющий собой белок, содержащий последовательности интерлейкина-2 и колоний-стимулирующего фактора гранулоцитов и макрофагов.

Производство белково-пептидных препаратов для медицинских целей - одно из наиболее бурно развиваемых направлений биотехнологии, в которое вкладывают огромные средства. В 1987 г. в США терапевтических полипептидов было произведено на общую сумму 568 млн. долл. Эта сумма, как предполагают специалисты, к 1995 г. возрастет до 1117 млн. долл. Ожидается, что к 2000 г. общая стоимость фармакологических препаратов и диагностикумов достигнет 100 млрд. долл.

Разработано несколько методов введения генов в яйцеклетки или в ранние эмбрионы где они включаются в хромосомы и передаются вместе с дочерними хромосомами во все клетки развивающегося организма. В зависимости от того, какой регулятор содержит чужеродный ген, он функционирует в разных тканях. Например, если к перенесенному гену независимо от того, откуда он выделен (из бактерий, растений чело века, животного), подсоединен регулятор гена мыши который в норме функционирует в печени, то перенесенный ген будет функционировать в печени трансгенного животного. Следовательно, подбирая регуляторный элемент к любому гену, можно заранее “запланировать” его работу в том органе, в котором желательно.

Получено множество трансгенных мышей, в которых согласно плану (т. е. в соответствующих тканях и органах) функционируют гены вирусов и бактерий, растений, разных видов животных и человека. В результате функционирования перенесенных генов в клетках гипофиза трансгенных мышей синтезируется гормон роста человека, крысы, крупного рогатого скота, в поджелудочной железе синтезируется совершенно нормальный инсулин человека, в клетках крови - гемоглобин кролика и т. д.
Шотландским генетикам (Джону Кларку и др.) из Исследовательского центра разведения животных в совместной работе с французским молекулярным биологом Ричардом Лате удалось получить трансгенных мышей, в молочных железах которых синтезировался белок молока овцы (р-лактоглобулин), т. е. им удалось изменить качество молока. В США известный специалист в области биотехнологии животных Катерина Гордон получила мышей, молочные железы которых продуцируют человеческий активатор плазминогена - ценный медицинский препарат. Сотни разнообразных генов разного происхождения перенесено в мышей, и как правило, эти чужие гены нормально функционировали там, где предусмотрел экспериментатор.

По имеющимся в литературе оценкам, к 2000 г. белки с измененными свойствами, полученные целенаправленной модификацией структуры кодирующих их генов, будут составлять примерно 4% всех потребляемых белков на общую сумму 15 млрд. долл. Общее же количество пищевых продуктов, получаемых с помощью биотехнологии, к концу XX п. увеличится, по расчетам специалистов, по крайней мере, в 10 раз.

На использовании микроорганизмов основано производство ими аминокислот, в первую очередь так называемых незаменимых, которые могут быть полезными добавками в пищу животных и человека. Среди незаменимых аминокислот, промышленное производство которых уже давно налажено, первое место занимает лизин, затем треонин и глутаминовая кислота. Получены штаммы Brevibacterium flavum, которые превращают в лизин более одной трети сахаров, содержащихся в питательной среде.

В СССР во ВНИИ генетики и селекции промышленных микроорганизмов с помощью генно-инженерных методов сконструированы высокопродуктивные штаммы Е. coli продуценты L-треонина, L-лизина и L-триптофана, которые используются и промышленности.

Интерес к микробиологическим способам промышленного производства аминокислот вызван также и тем, что они позволяют получать L-аминокислоты в чистом виде, тогда как при химическом синтезе получают рацемические смеси, содержащие L- и D-аминокислоты. Последние не входят в состав природных белков (они содержатся в незначительных количествах лишь в некоторых пептидах микроорганизмов, в частности пептидах, являющихся антибиотиками).

Производство витаминов. Напомним, что витамины - это низкомолекулярные органические соединения, роль которых для нормальной жизнедеятельности организма хорошо известна. Поскольку в пищевых продуктах витаминов содержится немного (10 - 100 мг на 100 г съедобной части продукта) и они быстро разрушаются, требуется витаминизация готовой пищи и продуктов. Поэтому уже давно витамины производят в больших количествах. Традиционные способы получения витаминов основаны либо на переработке больших количеств ценного сырья, либо (в редких случаях) на химическом синтезе. Поэтому витаминная промышленность нуждается в более эффективных технологиях. Такие технологии успешно создаются.

С помощью лишь генетических манипуляций (воздействием на регуляцию метаболизма) были получены штаммы микроорганизмов, которые производят в десятки тысяч раз больше витаминов, чем необходимо для их роста. Это - штамм Ashbya gossypii - продуцент рибофлавина, штаммы Pseuclomonas dеnitrificans и Propioribacterium freudenrcechii, производящие витамин В2 и др. В СССР на базе Bacillus subtilis сконструирован эффективный продуцент витамина B2.

Микробиологические технологии позволили решить и задачу производства аскорбиновой кислоты (витамин С). В Японии разработан эффективный ферментативный способ получения стабильного производного витамина С - аскорбил-2-фосфата, который используют в качестве антиоксиданта.

Помимо широкого применения в медицине в качест-пе профилактических и лечебных средств, получаемые микробиологическим путем витамины В2 и В2 добавляют в пищу животным для сбалансирования кормов.

Поскольку при СПИДе (по еще неизвестному механизму) поражается и центральная нервная система, которая закрыта от иммунной системы гематоэнцефалическим барьером, вакцина будет неэффективна после того, как вирус поразил эти органы. Кроме того, вакцины на основе убитых вирусов или вирусов с ослабленной инфекционностью, к сожалению, даже в опытных руках иногда могут служить источником инфекции (в США такие случаи были при вакцинации детей против полиомиелита). Более перспективны живые вакцины на основе рекомбинантного вируса осповакцины, созданные по схеме. Важно и то, на какой стадии заболевания используют вакцину. Очевидно, что вакцина против ретровирусов будет малоэффективна после того, как вирусная ДНК уже внедрилась в клетки.

Еще одна трудность лечения СПИДа состоит в том, что интегрированная вирусная ДНК может проявлять себя через длительный период, во время которого в ней могут произойти мутации, а при суперинфекции за счет механизма рекомбинации может в организме сформироваться более вирулентный (болезнетворный) штамм вируса. Сейчас основное направление состоит в попытках создать вакцины на основе белка оболочки ВИЧ. Такая вакцина, как ожидается, должна стимулировать появление антител, которые нейтрализуют вирус и будут также препятствовать взаимодействию вируса с клеткой-мишенью. Препятствием на пути получения такой вакцины является гиперизменчивость структуры белков оболочки ВИЧ. Сейчас ведется поиск консервативных (т. е. медленно изменяющихся) участков этого белка, способных выступать в качестве антигенов. Антитела, выработанные к таким участкам, оставались бы эффективными против вируса даже при гиперизменчивости других участков.

Для предотвращения связывания вируса с клеткой делаются попытки вводить в организм препараты рецептора CD4, который бы блокировал рецептор связывающие места вируса. При помощи методов генной инженерии уже получены препараты растворимого белка CD, В экспериментах вне организма этот препарат блокировал на оболочке ВИЧ участки связывания.

Одно из наиболее распространенных химических средств против СПИДа в настоящее время - азидотимидин (зидовудин), который подавляет процесс обратной транскрипции вирусной РНК. Избирательным антивирусным действием обладает препарат GLQ223, белок, выделенный из корневых клубней китайского огурца Trichosanthus kirillowi.

Блок трансляции вирусных мРНК возможен с помощью антисмысловых олигонуклеотидов. Уже синтезирован ряд таких соединений и показано, что они, связываясь с мРНК, препятствуют ее трансляции на рибосомах, т. е. мешают синтезу вирусных белков. Правильной модификации белков ВИЧ мешает кастаноспермин - растительный алкалоид. Выходу зрелых частиц ВИЧ (вирионов) из клеток препятствует а-интерферон, поэтому в принципе он может блокировать реинфицирование новых клеток.

Несмотря на то что обнаружено несколько агентов против ВИЧ, ни один из них не позволяет пока полностью предотвратить развитие заболевания. Обусловлено это множеством причин: нестабильностью соединений, наличием у них нежелательных побочных эффектов и главное - недостаточной эффективностью и др. В настоящее время исследователи не связывают свои надежды с каким-либо одним лекарственным препаратом. Видимо, необходима разработка разнообразных агентов способных воздействовать на разные этапы жизненного цикла ВИЧ. Но главное - это продолжающийся поиск принципиально новых подходов.